日益恶化的环境和快速的都市生活让无精、少精、弱精、精子畸形导致不育的年轻男性越来越多。Y染色体微缺失的分子诊断是少精子症和无精子症男性不育患者的常规基因检测项目。自1999年以来，欧洲男科学协会和欧洲分子遗传实验质控作网（EMQN/EAA）一直致力于提高Y染色体微缺失分子诊断质量，并出版了Y染色体微缺失分子诊断指南，提供了一套客观的检测质量评价实验方法。经过10年不断地临床积累，2013年9月19-21日，在犹他州佛罗伦萨开展的"男性不育遗传学"圆桌会议上，与会专家们就最新的Y染色体微缺失相关议题达成共识，EMQN/EAA在2004版指南基础上，综合与会专家意见共识和10年临床实践资料，再次对Y染色体微缺失实践操作指南做了跟新。

Y染色体微缺失检测方法推陈出新，实时荧光PCR法独领风骚
自从1999年第一份指导意见出版以来，Y染色体微缺失检测方法也在不断推陈出现。目前已经开发的检测方法有毛细管电泳法，实时荧光定量PCR，多重连接依赖性探针扩增技术（MLPA）和微阵列基因组杂交技术（array-CGH）。其中，Real-time PCR检测方法速度非常快，不涉及跑胶步骤，操作简单快捷，指南推荐每个有检测仪器的实验室采用。MLPA方法目前只有一篇英文摘要，基因芯片检测不仅花费昂贵，而且包含了太多不必要的位点。经过10多年的临床验证，最新版指南再次确认最初基于两管多重PCR的检测方法仍然有效，可适用于整个的AZF缺失项目确诊，对于部分特殊Y染色体检测结果的人群，只需要在此基础上稍做调整。

经典的6个STS位点仍是最佳选择
目前市场上开发的很多检测Y染色体微缺失的商用试剂盒，包含了过多的STS（sequence-tagged site，序列标签位点），这很可能会检测到很多假的缺失位点，尤其是当DNA质量不好，PCR条件不是最佳时。而大部分试剂盒并没有额外的单重PCR来确认可疑结果，而且已有文献并不能证明额外增加指南推荐STSs之外的位点有利于临床日常诊断，因此指南明确指出增加STS位点并不能提高检测的灵敏度，反而可能使结果复杂化、难以解释。

任何时候，实验室建立一种新的特殊方法，都需要经过大量样本验证，这些样本必须包含阳性和阴性对照用于评估方法学的特异性和灵敏度。报道时，必须明确提出所采用的方法，而不是简单的描述"根据指南方法"，最新版指南推荐方法只是两管多重PCR方法，检测位点如下：

AZFa： sY84，sY86；

AZFb： sY127，sY134；

AZFc： sY254，sY255 (都在DAZ基因上)

对照：SRY，ZFX，ZFY

Gr/gr缺失证实是损害精子生成的一个重要危险因素
Gr/gr缺失是AZFc部分缺失模式中具有临床意义的一种缺失，过去10年的研究已经证实gr/gr缺失是损害精子生成的一个重要危险因素。但是否需要将这种缺失类型设置成常规筛查指标，各专家之间意见不太一致。尽管Gr/gr缺失可导致AZFc区一半以上基因（精子细胞中特异性或显着性表达基因）丢失，但其临床意义仍存争议，因为该缺失患者精子生成表型变化多样，从少精到精子数目正常都有，且在不同人种和地域，gr/gr缺失表型都不一样，因此还需要更多的研究和临床数据来支持。

EMQN/EAA室外质量评估计划初见成效
从2000年开始，EMQN/EAA邀请AZF检测实验室进行"国际质量评估（EQA）计划"。从2000年到2012年间，参加质量评估的实验室从57家增加至148家，几乎增长3倍。诊断错误率（错误的表型描述可能会导致错误诊断）急剧下降，从开始前5年的8%到现在的1-2%。参与评估的诊断报告质量也快速提升，最近4年间，大约50%的分析报告都获得满分，与计划开始的前几年相比有了很大提升。总之，EQA计划非常成功，改善了参与实验室的实验操作，提高了其报告质量，且降低了误诊率。指南强烈推荐相关机构每年参加EMQN/EAA室外质量评估计划。

参考文献：
1、Krausz C， Hoefsloot L， Simoni M， et al. EAA/EMQN best practice guidelines for molecular diagnosis of Y‐chromosomal microdeletions： state‐of‐the‐art 2013[J]. Andrology， 2014， 2(1)： 5-19。

2、李铮， 朱晓斌， 郭安亮， 等. Y 染色体微缺失分子诊断的标准化探讨 (附 607 例分析)[C]//第十二届全国， 第七届全球华人泌尿外科学术会议论文汇编 (下册). 2005。