什么是FISH

荧光原位杂交的英文名称为 Fluorescence in situ hybridization，简写为FISH，也有学者通俗形象的称之为“钓鱼”技术。

从原理来看，其是采用一段已知基因片段带上荧光标记作为探针（探针作为“鱼饵”），将这种探针铺在细胞或组织样本上进行反应。每一种探针的 DNA 序列和待检测样本中的指定 DNA 靶位点序列的碱基如果是互补的，就能进行特异性结合（结合的状态就像是“鱼儿上钩”的过程），通过荧光显微镜就能在不破坏染色体或细胞结构的基础上观测到荧光信号在靶点的位置、大小及数量，从而判断被检测 DNA 序列的缺失、扩增及易位等结果，达到检测细胞、组织样本中的染色体或基因异常目的[1]。

图1  FISH技术原理图

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FISH技术的主要应用

 FISH技术可对待测标本DNA序列进行定位、定性和定量分析，是遗传学异常的主要检测手段之一。相较于核型分析，FISH技术具有快速、灵敏度高及特异性强的优势，目前在血液肿瘤中应用于以下几个方面^[2]：

1.诊断分型

根据世界卫生组织（WHO）第五版造血与淋巴组织肿瘤中的分类及建议，血液肿瘤诊断分型的主要依据是遗传学改变，如骨髓增生异常性肿瘤（MDS）、多发性骨髓瘤（MM）、急性白血病（AL）、慢性粒细胞白血病（CML）、淋巴瘤、T幼淋巴细胞白血病（T⁃PLL）以及其他特定染色体异常如慢性嗜酸性粒细胞白血病的del（4））（q1212）、伯基特淋巴瘤的t（8；14）（q24;23）、急性淋巴细胞白血病中的t（12；21）（p13;q22）等均需要借助FISH检测关键的遗传学异常才能精准分型。

2.预后分层

 世界卫生组织（WHO）、美国国立综合癌症网络（NCCN）指南已提出了基于遗传学异常的预后分层／评分体系，如急性髓系白血病检出PML/RARα融合基因等特殊基因，是一种预后良好的提示；急性淋巴细胞白血病检出 BCR-ABL 融合基因，则是预后不良的标志；多发性骨髓瘤如果有 1q21 扩增、p53 缺失以及 IGH/FGFR3、IGH/MAF 融合基因阳性的话，提示预后不良，而 IGH/CCND1 则相对较好；AML伴DEK::NUP214融合患者一般预后不良等等。因此，FISH检测在血液肿瘤的预后评估中发挥着不可替代的作用。

3.指导治疗

血液肿瘤通过治疗获得疗效后，肿瘤细胞显著减少，FISH 检测到原有异常的拷贝数也会相应下降、甚至转阴。通过检测治疗后疾病标志基因的下降程度或是否转阴，可以评估治疗的疗效。如慢性粒细胞白血病可以监测 BCR-ABL 融合基因，急性早幼粒细胞白血病可以监测 PML/RARα融合基因，慢性嗜酸性粒细胞白血病是新版WHO分类中伴PDGFRA重排髓系和淋系肿瘤中最常见的疾病。部分甲磺酸伊马替尼治疗有效的CEL患者，药物似乎是针对FIP1L1-PDGFRA融合基因形成的融合酪氨酸激酶。该基因是染色体4q12带内一种800kbp隐蔽的中间缺失的产物，在40%～60％CEL患者中存在。因此鉴定这种染色体重排对于这种疾病的治疗具有重要意义。由于常规细胞遗传学分析不能观察到亚微观的del（4q）。富半胱氨酸疏水区2（cysteine-rich hydrophobic domain 2，CHIC2）位于带4q12上FIP1L1与PDGFRA基因座之间，用该基因的缺失作为FIP1L1-PDGFRA融合指标是FISH（FIP1L1-PDGFRA融合基因的FISH探针）检测这种重排的有效方法。

备注：来源于参考文献^[2]

 荧光原位杂交技术因具有灵敏度高、特异性强、定位明确及结果客观等优点，在临床上还可应用于产前染色体数目检测、实体肿瘤基因检测等方面，担负着辅助诊断和指导临床用药的重任[3-5]。总的来说，FISH技术在基因诊断、肿瘤遗传、病毒感染等方面都发挥了重要作用，为临床提供了有力价值。

参考文献：

[1]Bayani J, Squire JA. Fluorescence in situ Hybridization (FISH). Curr Protoc Cell Biol. 2004;Chapter 22:.doi:10.1002/0471143030.cb2204s23

[2]中国抗癌协会血液病转化医学专业委员会，中国老年医学学会病理学分会，中华医学会血液学分会. 荧光原位杂交技术在血液肿瘤中的应用规范（2024年版）［J］.白血病·淋巴瘤，2024，33（4）：193⁃198. DOI：10.3760/cma.j.cn115356⁃20231124⁃00083.