一、手工操作与自动化操作的差异

临床检验的技术和概念，应该分为原先的手工操作和自动化操作。临床检验是从手工操作走向自动化操作的。至今也许还有许多人，以为自动化只是以机械动作替代了原先手工操作的做法而已。这是非常错误的！因此必须深入了解原先的手工操作，与现在的自动化操作之间的巨大差异！

临床检验的历史不长。顶多上百年。而使用化学试剂进行化学反应对分析物检测的历史，则更短。进行免疫方法检测的历史，还要短！只是70年左右的时间。至今，那些稍稍老一些的检验人员，如我经历过手工操作和自动化操作变更的人员，也许体会更多一些。但是，每个人有不同的认识和体会。在自动化仪器进入中国前，已经有不少检测方法为了适应自动化，有了很大的改变。可是，国外、尤其是国内，还体会不出，那些在操作上的变化，不仅仅是操作简单快速，而是许多做法和概念上的更新！我们当时，也包括我在内，只是看了报告的文章，发现检测方法有了很大改进，简化了操作。国内一些老前辈也纷纷在实验室模仿使用。但是，引入的后果浑然不知！严重影响了检测结果的准确度！还作为首先使用的人，在国内进行推广应用！

举例来说：肌酐、尿素、葡萄糖。这三项从引入国内作为经典的临床化学的主要项目，无一不是要进行无蛋白处理！对病人全血加入钨酸试剂后，过滤得到无蛋白血滤液。然后分别使用不同试剂进行检测，得到各个结果。有名的Folin-Wu名字，也许大家会知道。就是这位吴宪前辈，在拜Folin为师读博士学位时，实验解决了Folin无法使用碱性苦味酸去检测血液内肌酐的难题！吴宪发明了首先用钨酸沉淀血液蛋白和所有有形物后，对滤液进行检测。这个方法被推广到全世界！这样，使得很多原先无法检测血液内的分析物，现在都可以进行了！我1965年进入上海市医学化验所。在临床化学室，检验老师告诉我：临床化学最要紧的是两件事:做好无蛋白血滤液；第二标准要准。你的检测结果肯定没问题。但是，每天对所有标本必须进行钨酸试剂处理，要得到这些滤液很艰难！冬天沉淀很慢，费时费力！

国外报告了肌酐检测，可以不要进行钨酸前处理。直接使用血清加碱性苦味酸试剂，就可以比色检测了！这个方法很快在国内推广，而且即刻被写进检验书内！大家感到这样的方法多好！解放了劳动力！简化了操作！可是几乎没有人深入去思考：为什么原先做无蛋白血滤液，只是为了用全血做标本！现在用血清了，所以不必再做无蛋白血滤液了。

当时，临床实验室要了解检测结果的可靠性时，大多会做回收实验。但是怎样做回收实验？怎样的计算值可靠的？很少深入了解。我是在上世纪70年代，学到了Westgard的方法学评价系列文章。非常高兴。其中就有如何进行回收实验。当时我们已经自己制备控制品。为了了解，对处理过血清内外加肌酐后，血清内的肌酐浓度是否达到我们预期的要求。因此，开始进行回收实验。

二、回收实验实例

回收 (recovery)，分析方法对于样品中分析物的适当增量能实际检出的能力。用于该目的的实验为“回收实验”。

共有5例回收率结果，取平均回收率表示方法的回收水平。平均回收率为87.74%。理想状态的回收率为100%，它与   的差表示由回收实验估计的比例误差（proportional error , PE ）的大小。比例误差表达的方式有两种，一种直接用相对于100%回收率的差表示，写成PE( % )；一种是在医学决定水平分析物浓度下具有的比例误差量，直接以分析物浓度表示，写成PE。

进行回收实验计算上，还有人错误地将原样品中具有的分析物浓度也一并计入。这是错误的。回收指的是，实验加入分析物增量，实验是否可正确检测。与原样品中有多少分析物无关。如果要计入原样品中分析物浓度，将会有很大的误解。如样品中原分析物浓度为100，现加入的分析物为1。若该样品现在检测的浓度为100，按照错误理解，回收率为:100/101!几乎为100%！实际回收率为0！

四、总结

实验究竟错在哪里？重新阅读我2007年写的“临床检验质量管理技术基础-第二版”书后，我顿时羞愧难言！因为，我在书中讲的以回收实验去估计基质效应，是非常错误的！我要向所有读者抱歉！认错！还是这次有同道要我对回收实验做介绍，翻阅这本书这个内容，才发现有严重问题！

如果，我们依然如多年前手工操作那样，在使用碱性苦味酸检测前，首先对血清以钨酸处理；得到上清滤液后，再用碱性苦味酸检测内含的肌酐，这是可行的。因为，此时使用水配制的肌酐标准液与检测样品具有非常相似的基质状态。对滤液内加入肌酐标准液，这个回收样品与未加过标准的回收对照样品，也具有几乎相似的基质状态。这样一组回收样品与苦味酸反应，与标准肌酐的苦味酸反应几乎一致。由此，可以从反应的回收率，了解检测结果的正确度！但是，在上世纪70年代起推出的肌酐直接方法，没有考虑基质效应的影响。

标准液参与苦味酸显色反应时，与标本参与苦味酸反应具有的基质状态完全不同！因此，一定会严重影响检测结果的可靠性！在这个情况下，还用标准液进行回收实验，无法说明这个实验究竟揭示了什么问题。因此，回收实验只能诸如以往的经典钨酸前处理后，再用碱性苦味酸显色的肌酐方法！

今天，在临床实验室使用的检测方法，几乎全部是为自动化考虑的。也即，对人来源的血清、血浆直接在反应杯中，加入试剂反应。在这样的情况下，必须使用具有相似基质的标准作为参考。这个要求，促使推出了校准品。但是，校准品的定值又成了非常关键的内容。推动了互换性、溯源性、一致性的观点！无论什么实验，这些观点和做法，都离不开最最基本的方法学比较！以方法学比较说明情况，比什么都强！