上世纪80年代,上海市临床检验中心(原上海市医学化验所)为了在上海开展质量控制,自行开发制备控制品。为了防止血清内α脂蛋白在冷冻干燥过程中,因脂蛋白变性使血清在冻融后产生浑浊,在加工中必须首先以葡聚糖硫酸钠沉淀去除脂蛋白,方可使冻干后的血清制品复溶后没有沉淀,非常清晰。然后,经透析等步骤后,重新加入不少低分子的物质,包括肌酐。按照血清体积,计算需要添加的肌酐量后,将称量的肌酐直接倒入血清,搅拌后取样,以苦味酸方法检测回收量。但是,每次对肌酐检测加入前后的样品,总是发现最后得到的肌酐含量,仅是加入量的85%~90%。
是什么原因造成肌酐含量的下降?
1993年,我在中美临床实验室交流第一次会议上,听到了Dr Fred Lasky的报告。他介绍的就是基质和基质效应。我顿时被报告吸引了。原来在对血清内某个分析物检测时,在分析物周围的非分析物(即该分析物的基质),对检测结果有显著影响。被称之为“基质效应”。我立刻就想到,原来的肌酐检测,应该是去除蛋白后再行检测的,这可以完全消除了蛋白对肌酐检测的影响。因此,可以使用以水配制的肌酐标准,以苦味酸方法检测。现在,进行血清的直接检测,明显地受到血清内蛋白的严重影响。蛋白对肌酐检测的影响完全可以称之为基质效应。
因为,以肌酐水溶液为标准,进行血清不除蛋白的肌酐检测时,蛋白作为肌酐检测的基质,它们对肌酐检测结果的可靠性有着严重的影响。因此,我在配制检测用的肌酐标准液时,不再以水配制,而是直接采用透析完成、即将加入各个添加分析物的血清。这样在检测时,可以将未添加肌酐的血清为自身空白,将添加过肌酐的血清检测吸光度减去未添加肌酐血清的检测吸光度,即为添加肌酐参与苦味酸反应的吸光度。按照这样的做法,加入肌酐的回收率为100%。
采用真实的病人血清作“标准”(校准品),校准检测系统,再由该检测系统去检测病人血清,以此克服标准液和真实血清间的基质效应。但是,该“标准”血清内也含有要检测的分析物,它的浓度为多少?需要采用检测系统先检测。不同的检测系统(方法学、检测程序)对该“标准”血清的检测结果不同。因此,校准品的定值一定与检测它的系统有关。即:校准品的值依赖于检测系统;也一定没有各个检测系统通用的校准品。在疾病控制中心等实验室,他们对各种样品的检测,因为不同来源的样品很复杂,本身引入了样品的基质差异。为此,他们对每个样品进行三个实验检测:A、样品;加检测试剂。B、样品加标准液;加检测试剂。C、样品空白;加空白试剂。这样,以空白校0;检测样品和检测样品加标准的显色。以B检测信号减去A检测信号;为标准信号D。将A检测信号除以上述D信号,再与标准浓度相乘,即为该样品的分析物结果。这个方法非常实在。可惜,每个样品均需要做三个检测,非常费时。临床实验室无法实现。
克服标准和样品内分析物所处基质环境不一引起的检测差异。这样的做法应该讲是最佳的。但是,10个样品需要10个对应标准液,10个对应空白!1000个样品就需要1000个“标准液”!增加了实验室大量负担。这个做法在疾病控制中心对不同类型样品的检测,就是这样做的。结果说明非常有意义。可是实验室每天的样品量很大,这样的操作无法承受。最终,可以用于自动化检测的校准品,只能使用处理过样品。面临的问题是,如何对这样的校准品给予定值?Fred Lasky的报告是正确对校准品定值的做法。
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