1、为什么培养要设定35℃？

2、CO2对真菌生长影响大吗?

3、在血培养中培养出真菌2次，但是患儿没有临床表现，而且临床也没用抗真菌药患儿就好了，是考虑污染吗?

4、我们基层医院实际工作中做阴道分泌物真菌培养，生化鉴定几乎做不了，很多直接报白念珠菌，这样合适吗？

5、痰标本中少量念珠菌需要在报告中体现吗?还是不报告?

6、请问一下：前几天遇到一个抽出的脓液标本，打到血培养中，报阳后涂片显示真菌孢子，转种后涂片，形态上圆形，墨汁染色阳性，但是没有莢膜，转种科玛嘉没有颜色，后有白色有点黄色，用某国产鉴定显示近平滑，药敏全耐。问题是:①这个结果可信不?②墨汁用的是普通汁有影响吗?③该如何改进?

7、临床常见痰标本初次检出曲霉后,流程是怎么进行下去的?

8、酵母菌同化试验为什么放28℃而不是35C?同化试验和发酵试验有何区别?为什么教科书上说凡能发酵某种糖，一定能同化该糖，同化某种糖则不一定发酵该糖?

9、鉴于目前真菌培养不是很规范，如何选择培养基、温度、报告时间和方式?请讲述实验室的具体流程。

(1)培养基：沙氏葡萄糖琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、脑心浸膏琼脂等适宜真菌生长的培养基，临床疑似酵母菌及酵母样菌感染，有条件实验室可平行接种显色培养基，推荐采用螺口管斜面培养法，标本处理后接种于培养基斜面中下部，真菌绝大多数为需氧菌建议平行接种两管。

(2)培养条件及报告时间：深部真菌28±1℃培养7~14d，如怀疑双相真菌感染，应同时在28士1℃及35士1℃培养。

怀疑罕见真菌慢生长真菌感染或临床已用抗真菌药物时，延长观察时间至少培养4周。

如CSF宜置28℃及35℃两个温度培养至少一周；

痰/尿/粪一般35℃48h即可，如未见丝状真菌生长，则延长培养时间；

组织标本一般30℃，2~4周。

10、是否可以用科玛嘉显色培养基作为真菌初代培养基?

可作为初代培养基之一，建议另外接种沙氏培养基或酵母氮培养基(YPDA)，SDA和YPDA一般是酵母样菌的标准培养基。

11、咽拭子真菌培养有意义吗?

12、请问痰标本念珠菌定植率那么高，痰涂片看到比较多的孢子和假菌丝要怎么报告才比较合理?

个人觉得还是要如实报告临床医生、并将标本质量是否合格告知临床医生，至于是否感染，临床医生会根据影像学资料、患者临床表现等综合考虑的。

13、患者的手上有湿疹一样的丘疹,怀疑真菌感染,请问怎么样采样好?

对于皮损类的标本采集，需要用70%的酒精先将患处消毒处理，再使用已消毒的不锈钢刮刀或外科手术刀在皮损边缘刮取皮屑，装在无菌容器内送检。

14、我们用一次性手套装SDA平板可以吗?

一次性手套无论是PV还是乳胶，都会产生相对低氧的环境，而真菌是需氧菌会影响真菌的生长，不建议这样操作。

可以使用透气性好的胶带(静脉输液固定针头的)封闭平板，注意不要封太死。

15、用的墨汁在显微镜下不是均匀的黑色背景，而是一些细小黑色颗粒，这是不是墨汁的质量不好?还有,生物安全柜、超净工作台和通风柜三者有什么区别?

墨汁本身就是一些细微小颗粒加入溶媒形成的，墨汁质量的好坏在于颗粒的大小和均一性。

一般的墨汁检测隐球菌应该能观察，它只是作为背景,荚膜不染色，为透明的，背景是黑色。

生物安全柜和超净工作台的区别在于风吹的方向：

生物安全柜的风向是先垂直向下再向柜内，经过循环通过HEPA过滤后再排出，柜内形成一个相对负压的环境；

超净工作台的风向是先向下再向外吹，保证柜内的清洁无尘，通常用来配置平板和操作一些简单的分子克隆相关实验。

通风柜是通过风机将柜内的空气排到实验室外，通常用来配置有挥发性的化学品试剂，有害气体排向室外。

16、痰涂片中看到曲霉头，有多大临床意义?毛霉有没有污染可能？或者是定值？在痰里一直检查到青霉菌,没有意义吗?

如果痰标本直接镜检发现曲霉头，那就要考虑是曲霉感染。培养可以确定是哪一种曲霉。

毛霉存在污染的可能性，空气中也可以存在，但又因其高度的侵袭性，报告需谨慎，定值的可能性很小，但操作中污染的情况还是不少的。若标本合格，湿片镜检有90度分枝及粗大、不分隔的菌丝，那就要考虑感染了，否则有污染可能，最好及时联系临床医生。

青霉菌是一种条件致病真菌，如果痰中直接镜检查到菌丝，培养阳性，还是考虑感染。

17、在经验积累的初期，如何得到足够的菌株，用于练习各类染色、阅片呢?

有条件的话，最好到相关医院真菌室进修学习湿片镜检、真菌鉴定，将保存的菌株分批转种后，仔细研究其菌落颜色、大小质地等变化和镜检变化，并做好笔记。或参加医学真菌专业培训班进行系统学习。

18、如何保存真菌菌株?

最好的方法就是真空干燥、低温冻存。国际菌株保藏机构都是这种方法。

(1)将生长的斜面直接放在-10℃冷冻，表皮癣菌和许多接合菌纲菌种不可用此法保存。

(2)蒸馏水保存法：将生长在马铃薯葡萄糖培养基上的成熟的菌落，刮取菌丝体、芽孢或酵母细胞或利无菌蒸馏水冲洗斜面表面，再以吸管吸取放在无菌小管中，密封阻止蒸发，置于室温保存。

(3)另一种方法为直接加无菌矿物油至霉菌生长的琼脂斜面，至少可保存半年以上。

(4)基础液体培养基中加入15%~30%甘油，将新鲜成熟菌落挑至其中，-80℃保存。

19、一般什么样的患者我们会重点去关注是否为真菌感染呢?

免疫缺陷病患者、器官移植患者、肿瘤患者、中性粒细胞减少患者糖尿病患者及较长时间使用广谱抗生素的患者。

20、霉菌培养箱(28C)被污染后如何处理?培养基放进培养箱后很快长污染菌，尤其门上的密封条上也长菌了，怎么办?

断电后，甲醛熏蒸,5%苯酚(石炭酸)擦拭后停留30min后，清水擦拭，打开通风24h后再使用。

21、血培养中可能培养出哪些丝状真菌?哪些是污染?

血培养阳性的丝状真菌主要有组织胞浆菌、马尔尼菲蓝状菌、镰刀菌、念珠菌、隐球菌、毛孢子菌、赛多孢，人眼球组织(研磨后打入血培养瓶)里曾培养出紫色拟青霉。腹水打入血培养瓶培养出棕黑腐殖霉。

文献报告皮炎芽生菌、伊蒙菌、球孢子菌都可以从血培养里培养出来。

烟曲霉是污染的,有报告土曲霉的心内膜炎患者外周血培养出来土曲霉[ I Clin Microbiol.1998Nov;36(11):3347-51]。

22、呼吸科患者，男，61岁，诊断支气管肺炎，HIⅣ阴性，在合格痰内培养出马尔尼菲蓝状菌3+，可以诊断吗?有必要复检吗?

他肝脾大吗?是否有骨骼受累及?皮肤受累及?还是仅仅局限在肺部?患者有其他基础疾病吗?

建议重送标本，如果反复培养出马尔尼菲蓝状菌要警惕。痰中培养出马尔尼菲蓝状菌，应该可以认为是致病性真菌。

马尔尼菲蓝状菌和曲霉菌丝区别：

如果在直接的临床标本中(体内)，马尔尼菲蓝状菌是酵母样的孢子，而曲霉菌是分枝分隔成45度角的菌丝。

如果在体外28℃培养物马尔尼菲蓝状菌可为淡黄色、黄绿色，背面红色，有红色色素渗透培养基中；

而曲霉开始为白色，表面可为不同颜色的颗粒，以此区分为何种曲霉。

马尔尼菲蓝状菌可以见到帚状枝，而曲霉可以看到曲霉头。