假如您从事新冠核酸检测体系的开发和评估，想问问您是否遇到过以下问题：

? 非特异性扩增、引物二聚体？

? 灵敏度上不去，检出率低？

? Taq酶性能不稳定，qPCR线性关系差？

遇到这些问题莫要慌，翊圣Hieff? Taq酶单克隆抗体来救驾！ Hieff? Taq酶单克隆抗体高效封闭Taq酶的DNA聚合酶活性，减少非特异扩增，增加稳定性，可助力你的单拷贝检测！

Hieff? Taq酶单克隆抗体的工作原理

我们知道新冠病毒的核酸检测首先要避免的就是非特异性扩增，因为非特异性扩增不仅直接影响检测结果的判读，还会消耗反应体系中的引物等物料，导致目的基因扩增失败。 Hieff? Taq酶单克隆抗体可以在低温时，结合于Taq DNA聚合酶，封闭其聚合酶活性，防止错配或引物二聚体引起非特异性扩增；在PCR预变性95℃加热时，抗体蛋白变性，释放DNA聚合酶活性，完成扩增反应，此正所谓抗体法热启动的原理。

Hieff? Taq酶单克隆抗体在新冠核酸检测中的作用

我们在新冠核酸检测试剂的开发工作中，发现了许多Hieff? Taq酶单克隆抗体的大作用。

1. Hieff? Taq酶单克隆抗体有助于提高检测灵敏度

以CDC推荐引物探针方案，翊圣Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES）检测105 copies / mL（图1）和103 copies / mL（图2）的假病毒。图中红色曲线为Hieff? Taq酶单克隆抗体以1:5封闭（测定封闭效率为97.34%）进行的扩增反应的扩增曲线；黑色曲线为1:15封闭（测定封闭效率为19.06%）进行的扩增反应的扩增曲线。

图1Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES）检测105 copies / mL假病毒

图2 Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES）检测103 copies / mL假病毒

实验结果显示，对于高拷贝检测，使用抗体可提高平台期荧光强度；对于低拷贝检测，使用抗体不仅提高平台期荧光强度，还能使Ct值提前，提升灵敏度。

2. Hieff? Taq酶单克隆抗体助力个位数拷贝检出

我们利用Hieff? Taq酶单克隆抗体优化生成高灵敏度检测试剂Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES），以某IVD企业ORF1ab和N基因的探针和引物，检测个位数拷贝的假病毒，检出率结果如图3。

图3 检出率测试：25 μL反应体系加5 μL假病毒，20复孔检测检出率

检出率测试结果显示，500 copies / mL（2.5 copies / rxn）的假病毒检出率为95%。

3. 使用Hieff? Taq酶单克隆抗体获得良好的线性关系

以CDC推荐引物探针方案，翊圣Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES）检测107 - 104copies / mL的假病毒。图中红色曲线为Hieff? Taq酶单克隆抗体以1:5封闭（测定封闭效率为97.34%）进行的扩增反应的扩增曲线；黑色曲线为1:15封闭（测定封闭效率为19.06%）进行的扩增反应的扩增曲线。

图4 10倍梯度稀释假病毒扩增曲线

标准曲线显示，封闭效率为97.34%的扩增结果线性良好，R2=0.9978；封闭效率为19.06%的扩增结果线性较差，尤其对于低拷贝数的检测，Ct值变大，线性相关性只有0.0089。

如此优秀的Taq酶单克隆抗体，你从何而来

1. 成熟的放大生产工艺——翊圣Hieff? Taq酶单克隆抗体是翊圣生物自研自产的一款高品质热启动封闭抗体。小鼠腹水生产，月产量高达40g。不同于人工操作体外模拟生长环境的罐间悬浮生产，小鼠腹水能提供天然的细胞生长环境，营养充足，有利于杂交瘤细胞的生长。另一方面腹水属于天然免疫系统，抗体折叠修饰翻译更加天然，保证了抗体的结构性能。

2. 高标准生产流程和专业的研发团队——翊圣Hieff? Taq酶单克隆抗体经历了高标准的生产流程，细微之处做到极致。包括生产环节中诸多要求，如在超净工作台区域进行防污染的佐剂致敏，筛选出高抗体表达量的杂交瘤细胞进行细胞扩大培养，高纯度标准，温和的纯化工艺等。值得一提的是，热启动封闭抗体结合位点非常重要，一个优质的热启动封闭抗体，应该能精准结合，有效阻断DNA聚合酶的聚合酶活性。翊圣为此做了大量筛选工作，最终成功筛得这款可封闭各种Taq酶突变体的抗体。

3. 严苛的质量控制——翊圣Hieff? Taq酶单克隆抗体的质量控制包括核酸外切酶残留、核酸内切酶残留、小鼠核酸残留、功能验证（图5）、封闭效率检测、批内稳定性、批间稳定性等。封闭效率的质控标准为95%，对标业内最高标准。

图5 熔解曲线测定性法：设置非热启动组、抗体封闭组、和无聚合酶对照组，将模板和引物对加入SYBRGreen染料法qPCR的反应体系中，37℃孵育40min，分别检测熔解曲线。非热启动组显示出有扩增产物生产，而另外两组是引物二聚体，没有产物形成。这说明抗体封闭效果明显。