一、临床标本细菌检验的基本程序

二、血液感染

◆正常人的血液是无菌的。

◆菌血症是指在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性在血中存在。
◆败血症是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身中毒症状。
◆脓毒血症是指化脓性细菌败血症时，细菌通过血流扩散至全身其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。

（一）常见病原菌

（二）标本采集

1.采血时间和频率　 
病人发热初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。但怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。

2.采血量　 
一般为静脉采血，成人采血量10～20ml，儿童3～5ml，婴儿1～2ml。 

3.床边直接注入血液培养基，否则用SPS抗凝剂送检，不得用EDTA，枸橼酸钠抗凝。

4.检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管5cm远侧段，置无菌容器内送检。

（三）微生物分离培养和鉴定

1.培养基的选择　 
用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧＋厌氧，需氧＋高渗等。

2.分离和鉴定　当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验：
（1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系；
（2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定；
（3）同时做药敏试验，结果及时报告临床作治疗参考。

（四）报告方式

阴性结果： 
◆7d报告无细菌生长。 
◆疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长者可报告为阴性。
阳性结果——三级报告方式： 
◆第一级报告告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验； 
◆第二级是报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验； 
◆第三级报告正式鉴定和药敏试验结果。

（五）临床意义

◆葡萄球菌菌血症常由疖、痈、脓肿及烧伤创面等原发感染灶继发，也可由呼吸道感染引起。 
◆G-菌主要侵犯危及机体免疫功能低下的病人，耐药菌株不断增加。 
◆厌氧菌的菌血症常合并需氧菌感染，临床症状较重而复杂。 
◆L型菌的菌血症主要由于使用抑制细菌细胞壁合成的抗生素后，由缺损细胞壁的细菌感染所致。 
◆免疫低下者常出现真菌菌血症。 
◆院内感染菌血症不断上升。

三、中枢神经系统感染

（一）常见病原微生物 

（二）标本采集

◆用药前，无菌操作腰穿方法采集2～3ml，盛于无菌试管常温下立即送检。 
◆天冷时保温，不可冰箱保存。 
◆用于病毒检测时应冷藏送检。

（三）检验方法

1.涂片镜检　离心3000rpm，15分钟。 
革兰染色（一般细菌）、抗酸染色（分支杆菌）、墨汁染色（隐球菌）、电镜检查（病毒颗粒）。
2.分离培养　5g/L葡萄糖增菌肉汤、血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板、巧克力平板。结核菌接种罗-琴培养基或米氏7H10培养基。真菌培养接种沙氏培养基。病毒培养常用动物接种、鸡胚接种、细胞培养。
3.血清学检测可直接检测抗原。

（四）临床意义

◆细菌性脑膜炎是中枢神经系统感染的常见类型。 
◆真菌性脑膜炎最常见于隐球菌脑膜炎，其他的真菌性脑膜炎如白假丝酵母、球孢子性脑膜炎日渐增多，特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易发。 
◆流行性乙型脑炎可获得持久免疫力，再次发病者极少见。 
◆肠道病毒对中枢神经系统的危害性逐渐引起人们的关注和重视。

四、呼吸道感染

呼吸道按解剖结构分为上呼吸道和下呼吸道。 
◆上呼吸道感染主要指喉及喉以上的呼吸道感染。 
◆下呼吸道感染主要指气管、支气管和肺的感染。

（一）上呼吸道的正常菌群 

1.球菌　凝固酶阴性葡萄球菌，链球菌，微球菌，奈瑟菌，厌氧球菌。
2.杆菌　棒状杆菌，嗜血杆菌，类杆菌，梭杆菌。

 （二）常见病原微生物 

（三）标本采集

1.采集方法
（1）上呼吸道：常采用鼻咽拭子；在扁桃体部位、咽后壁及口腔内炎症、溃疡或渗出部位采样时，应先用清水漱口，再采集标本。
（2）下呼吸道：常采用自然咳痰法、支气管镜采集、胃内采集、咽拭子。清晨第一口痰为宜，最好在用抗菌药物前采集，必须先用清水漱口，避免唾液混入。
2.立即送检。

（四）检验方法

1.涂片： 
◆检查细菌常用革兰染色、抗酸染色； 
◆检查隐球菌采用墨汁染色； 
◆军团菌、支原体、病毒等可用免疫荧光抗体染色。 
◆合格的痰标本： 
白细胞＞25个/低倍视野，鳞状上皮细胞＜10个/低倍视野。 

2.分离培养
（1）痰标本的前处理一般是用无菌生理盐水将痰洗净，再加入胰酶溶液使痰均质化。
（2）普通细菌培养采用血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板、巧克力平板。

（五）临床意义

◆注意采集合格的下呼吸道标本，以提高检出率和阳性的正确率。 

◆一些条件致病菌和耐药菌成为医院内肺炎的主要致病菌。 
◆真菌性肺炎多为条件致病性真菌感染，常见的以白假丝酵母菌为主。 

五、尿路感染

◆上尿路感染：主要有肾盂肾炎 
◆下尿路感染：主要有膀胱炎和尿道炎

（一）常见病原微生物

（二）标本采集
1.采集时间　一般为晨起第1次尿送检。

2.采集方法　 
◆清洁中段尿：常采用，采集标本前要用肥皂水或碘附清洗外阴（女性）或阴茎头（男性）。 
◆肾盂尿采集法； 
◆膀胱穿刺法； 
◆导尿法：最好，防止逆行性感染。

3.注意事项　 
◆严格进行无菌操作，尽量避免污染菌，立即送检，不超过1h，尿中不得加任何防腐剂和消毒剂。

（三）分离培养

1.培养基的选择　 
◆普通细菌选用血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板。特殊细菌使用特殊、选择培养基。
2.尿细菌定量培养。

（四）结果报告

1.阴性　一般48h无细菌生长。

2.阳性　菌落计数、鉴定及药敏结果。 
◆G-杆菌＞105cfu/ml； G+球菌＞104cfu/ml，有诊断意义。 
◆G+球菌＜104cfu/ml，多为污染；G+球菌104～105cfu/ml，可疑阳性。 

3.尿路感染的细菌数少于105CFU／ml时多见于以下几种情况： 
◆应用抗菌药物，尿中细菌发育受到抑制； 
◆使用低敏感性药物，大多数细菌停留在104CFU／ml； 
◆尿浓度变化大时及pH在5.0以下8.5以上，则发育受阻； 
◆尿频时； 
◆病原菌发育要求条件高时； 
◆采尿时外阴部消毒剂混入尿中。

六、消化道感染

（一）常见病原菌 

◆肠毒素为主的病原菌： 金葡，霍乱弧菌，志贺菌，ETEC/EHEC/EAggEC，产气荚膜梭菌，艰难梭菌 
◆侵袭性为主的病原菌： 沙门菌，志贺菌，EPEC/EIEC，小肠结肠炎耶尔森菌，副溶血弧菌，结核分枝杆菌，白假丝酵母菌 
◆病毒：轮状病毒，埃克病毒，Norwalk病毒，腺病毒

（二）标本采集与运送

1.采集时间　急性期、尽量在用药前采集。
2.采集方法　 
◆自然排便采集法、直肠拭子。 
◆标本不能及时接种时，应在标本中加保护剂或用相应的运输培养基。 

（三）分离培养

培养基的选择： 
◆普通致病菌如沙门菌、志贺菌等可选用SS琼脂平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板。 
◆特殊细菌如弯曲菌、弧菌、厌氧菌等选择相应的选择性培养基。 
◆病毒可用细胞培养。

（四）临床意义

◆感染性腹泻由多种病原体感染所致。 
◆消化性溃疡由幽门螺杆菌感染引起。 
◆轮状病毒常引起幼儿腹泻，腺病毒是引起儿童腹泻的主要病原，还可引起成人腹泻，埃可病毒常引起婴幼儿腹泻，Norwalk病毒常感染成人和大龄儿童。

七、性传播疾病

性传播疾病（STD）：以性行为为主要传播途径的-组传染病。

（一）常见性传播疾病及其病原体

性传播疾病：梅毒、淋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿、细菌性阴道病、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、生殖器疱疹、病原体   、梅毒螺旋体、淋病奈瑟菌、杜克嗜血杆菌、沙眼衣原体性病淋巴肉芽肿生物亚种、阴道加德纳菌和类杆菌等厌氧菌、沙眼衣原体沙眼生物亚种、支原体、人乳头瘤病毒、人类单纯疱疹病毒2型

（二）标本采集

◆拭子取尿道脓性分泌物（男性）或宫颈分泌物（女性），供培养及镜检； 
◆梅毒病人取皮肤渗出液和淋巴穿刺液涂片； 
◆疱疹抽取疱内液体，或刺破小疱后，用无菌拭子采样。

八、创伤和外科感染

（一）常见病原菌

（二）标本采集

◆组织创伤用拭子采集标本； 
◆施行清创术时，可选择合适部位采集标本送检； 
◆骨髓炎病人应取骨髓活检标本，如损害部位已形成窦道，可采取窦道引流液； 
◆脓肿时取内部脓汁及脓肿壁标本。　　

（三）临床意义

◆由创伤、手术、侵入性器械操作等外科治疗引起的感染最为常见。 
◆感染以化脓性炎症改变为主。外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见。 
◆深部创伤易引起破伤风和气性坏疽。 
◆烧伤创面以革兰阴性杆菌最常见，次为革兰阳性球菌感染。 
◆急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌感染所致。
◆慢性化脓性骨关节炎、慢性骨髓炎常由结核分枝杆菌引起，葡萄球菌、链球菌也常见。