百日咳是由百日咳鲍特菌感染引起的急性呼吸道传染病，患者表现为阵发性痉挛性咳嗽伴鸡鸣样回声，病程绵延数月，故称百日咳。由于接种疫苗后产生的免疫力衰减和百日咳鲍特菌变异等因素，全球很多疫苗覆盖率较高的国家出现了“百日咳再现”[1]。我国自上世纪80年代百日咳疫苗的大规模接种后，百日咳得到了较好的控制，长期处于低水平流行，也因此导致相关研究停滞。笔者团队自2011年关注到国外百日咳再现的现象后，做了一些研究，其中最基本的就是其实验室诊断技术。近期很多同行也向笔者咨询，故做了总结如下：

一、外周血常规及涂片检查

白细胞和淋巴细胞数量明显增高可作为百日咳的诊断标准之一。当感染百日咳杆菌时，外周血白细胞计数会增高，一般可达到（20～50）×109/L，其中淋巴细胞比例占60%～80%[2]，而有意思的是，常见急性时相蛋白如CRP，SAA等一般却不增高，或增高有限。研究认为，在外周血涂片中由百日咳毒素（PT）诱导产生的裂隙淋巴细胞对百日咳的诊断具有很强的提示意义[2]。我们实验室都会对这些典型血常规结果进行临床提示。

血常规报告提示临床排除百日咳鲍特菌

二、细菌培养及抗原检测

细菌培养并分离出百日咳鲍特菌是百日咳诊断的“金标准”。然而，在患儿已使用抗生素、接种疫苗、既往感染、病程较长或样本保存运送条件不当等因素影响下，检出率仅为0～30%，灵敏度较低。此外，由于实验操作周期较长（3～7 d），目前细菌培养法已很少用于临床百日咳诊断，但该方法在分离百日咳鲍特菌及药物敏感性检测方面仍有重要意义[3]。国外也有百日咳抗原检测的试剂，但在我国尚无相关产品。

百日咳鲍特菌在炭琼脂平板的菌落

三、血清学方法

由于IgM抗体的特异性不佳等因素，如果患者咳嗽了2~3周或更长时间，通过ELISA检测抗PT-IgG水平进行诊断最有效[5]。抗体血清学诊断的标本易获取，操作简单快捷，但抗原进入后需经过一定的潜伏期才会产生抗体，因此在诊断早期百日咳时，抗体检测还存在一定时间限制；另外要注意的是，百日咳疫苗接种也会导致PT-IgG水平升高，因此在应用时对于1年内接种过百日咳疫苗的患者需谨慎判断。

四、核酸检测

核酸扩增已成为一种成熟的检测百日咳病原体的方法。其中，qRT-PCR（实时荧光定量PCR）因其耗时短、灵敏度高、污染风险小已替代传统PCR成为国际诊断百日咳的首选方法。目前，我国已有3家公司具有批准上市的百日咳鲍特菌核酸检测试剂盒。详情请点击警惕百日咳来袭！3家IVD企业助力精准诊断查看。

综上所述，尽管血常规检测对百日咳诊断是非特异性的，但对于无发热或低热伴咳嗽患者，白细胞计数和淋巴细胞计数增加、CRP或SAA正常或略高是典型病例的典型特点。

而针对其它几种特异性检测方法，笔者发表于2013年的研究论文中也进行了比较[6]，在使用中要关注其阳性率及病程：在儿童患者中，核酸检测方法阳性率最高，更适合在发病3周内应用，而单份血PT-IgG宜在发病2-3周后应用。

三种百日咳实验方法与100例阳性标本数交集图[6]

参考文献：

[1] 国家卫生健康委员会，百日咳诊疗方案（2023版）

[2] 许秀妆, 章金灿. 裂隙淋巴细胞辅助诊断儿童百日咳的临床价值 [J]. 中国当代儿科杂志, 2020, 22(9):996-1000. DOI:10.7499/j. issn.1008-8830.2002205.

[3] van der Zee A , Schellekens JF , Mooi FR . Laboratory diagnosis of pertussis[J]. Clin Microbiol Rev, 2015，28(4)：1005-1026.

[5] 张雨笑, 谌志筠, 何秋水. 国内外百日咳实验室诊断标准现状及血 清学诊断的应用价值[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2017, 37 (7):560-564.

[5] May ML , Evans J , Riley J ,et al. Development and validation of an Australian in-house anti-pertussis toxin IgG and IgA enzyme immunoassay[J]. Pathology, 2013，45(2)：172-180.

[6]  王增国, 杨杨, 刘莹, 等. 百日咳实验室诊断方法的应用分析与比较. 中华流行病学杂志 2013, 34(10): 1010-1012.

作者简介

温金：西安交通大学附属儿童医院、西安市儿童医院

王增国：西安交通大学附属儿童医院、西安市儿童医院检验科主任。承担百日咳研究的国家自然科学基金2项，陕西省科学技术奖励1项。

来源：全国体外诊断网 CAIVD