引用

[1]陈小娟,向尹,陈俊良,等.结核分枝杆菌游离DNA检测在肺外结核诊断中的价值[J].检验医学与临床,2024,21(3):299-303.

关键词：结核分枝杆菌; 结核分枝杆菌游离脱氧核糖核酸; 结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测; 结核感染T细胞γ干扰素释放试验; 肺外结核

目的

探讨结核分枝杆菌(MTB)游离DNA(cfDNA)检测技术在肺外结核诊断中的应用价值。

方法

    

选取2021年7月至2022年12月该院收治的高度疑似肺外结核患者266例作为研究对象,根据临床诊断结果,分为肺外结核组117例和非结核组149例。所有患者均采集脑脊液、胸腔积液、尿液及血液标本,并同时进行MTB cfDNA检测、结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(GeneXpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色及血液标本结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA)。通过分析4种检测方法的效能指标评估MTB cfDNA检测技术在肺外结核病诊断中的临床价值。

结果

MTB cfDNA检测法、GeneXpert MTB/RIF和涂片抗酸染色对肺外结核患者不同类型标本中MTB的检出率比较。非结核组各类型标本均未检出MTB阳性病例。根据临床最终诊断,肺外结核组包括结核性脑膜炎20例、结核性胸膜炎57例、泌尿系统结核31例、其他部位结核9例(淋巴结核3例、脊柱结核5例、肠结核1例)。MTB cfDNA检测法对脑脊液中MTB的检出率为25.00%,对胸腔积液的检出率为22.81%,对尿液的检出率为38.71%,对血浆检出率为11.11%。MTB cfDNA检测法对脑脊液、胸腔积液、尿液中的MTB检出率均显著高于涂片抗酸染色(P<0.05)。虽然MTB cfDNA检测法对脑脊液、尿液中MTB的检出率高于GeneXpert MTB/RIF,但差异无统计学意义(P>0.05);MTB cfDNA检测法对胸腔积液中MTB的检出率显著高于GeneXpert MTB/RIF(P<0.05)。见表1。

    

MTB cfDNA检测法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色、TB-IGRA在两组患者中的MTB检出率比较。在肺外结核组,MTB cfDNA检测法对MTB的检出率为26.50%(31/117),明显高于GeneXpert MTB/RIF[15.38%(18/117)]和涂片抗酸染色[3.42%(4/117)],差异均有统计学意义(P<0.001);而TB-IGRA对MTB的检出率为72.65%(85/117),明显高于MTB cfDNA检测法(P<0.001)。在非结核组,MTB cfDNA检测法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色对肺外结核相关体液标本进行的MTB病原学检测均未检出阳性病例,但TB-IGRA 检出阳性47例。见表2。

MTB cfDNA检测法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色、TB-IGRA对肺外结核的诊断效能。MTB cfDNA检测法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色、TB-IGRA诊断肺外结核的灵敏度分别为26.50%、15.38%、3.42%、72.65%,特异度分别为100.00%、100.00%、100.00%、68.46%,阳性预测值分别为100.00%、100.00%、100.00%、64.39%,阴性预测值分别为63.40%、60.08%、56.87%、76.12%。MTB cfDNA检测法的灵敏度明显高于GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色,差异均有统计学意义(P<0.05);TB-IGRA的灵敏度显著高于MTB cfDNA检测法,但其特异度显著低于MTB cfDNA检测法,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

讨论

肺外结核由MTB侵犯肺部以外的组织器官引起,常见类型有结核性胸膜炎、结核性脑膜炎、结核性腹膜炎、泌尿系统结核、淋巴结核、肠结核、腹部结核等。MTB在正常代谢、凋亡或被破坏后可释放其特异cfDNA片段IS6110并可通过PCR检测。有研究发现,肺外结核患者相关部位非痰液标本中MTB特异性cfDNA的灵敏度和特异度可能高于诊断肺外结核的痰液标本。本研究收集了肺外结核患者相应部位的非呼吸道体液标本(脑脊液、胸腔积液、尿液、血浆)进行MTB cfDNA检测,检测靶基因为IS6110,通过比较其与GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色以及TB-IGRA检测的灵敏度、特异度等效能指标,初步探讨MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中的应用价值。

本研究以CRS为参考标准,以临床最终诊断结果为金标准,MTB cfDNA检测法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色、TB-IGRA诊断肺外结核的灵敏度分别为26.50%、15.38%、3.42%、72.65%,特异度分别为100.00%、100.00%、100.00%、68.46%,阳性预测值分别为100.00%、100.00%、100.00%、64.39%,阴性预测值分别为63.40%、60.08%、56.87%、76.12%。MTB cfDNA检测法的灵敏度明显高于GeneXpert MTB/RIF与涂片抗酸染色检测,而明显低于TB-IGRA检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。GeneXpert MTB/RIF为世界卫生组织推荐的诊断肺结核及肺外结核的分子快速检测方法,近年来已在临床广泛应用。但GeneXpert MTB/RIF对于低菌量标本的检出率低,且对于不同类型标本灵敏度差异较大,有研究报道其在胸腔积液中MTB检出率最低。对于肺外结核相关标本,由于其不易获得大量标本且含菌量低,涂片抗酸染色的检出率极低。本研究在肺外结核组患者相关部位的非痰液标本检测中,MTB cfDNA检测法对MTB的检出率为26.50%,明显优于GeneXpert MTB/RIF及涂片抗酸染色,提示MTB cfDNA检测在肺外结核的诊断中具有较好的应用前景。TB-IGRA是通过检测人体免疫系统对MTB感染的免疫反应来判断结核感染存在与否。患者的免疫状态、疾病状态、性别和年龄等因素均可能影响到TB-IGRA的结果,其特异度较MTB的病原学检测低。在使用TB-IGRA进行结核病诊断时,需要综合考虑临床症状、病史以及其他检测结果,故其对结核病诊断存在一定的局限性。本研究中TB-IGRA灵敏度明显高于MTB cfDNA检测法、GeneXpert MTB/RIF及涂片抗酸染色,但是其特异度仅为64.39%,而其他3种病原学检测方法的特异度均为100.00%,提示对肺外结核的诊断与病原学检测方法联合使用可获得较好的诊断效能。

笔者进一步分析了使用不同类型标本的MTB cfDNA检测在肺外结核中的诊断效能,结果显示MTB cfDNA检测法对尿液中MTB的检出率最高,对脑脊液和胸腔积液中MTB的检出率次之。与GeneXpert MTB/RIF相比,MTB cfDNA检测法对各类型标本中MTB的检出率均升高,但两种检测方法仅对胸腔积液中MTB检出率的差异有统计学意义(P<0.05),提示其对结核性胸膜炎的诊断与其他分子检测方法相比更具优势,这也与多项研究结果相符。在对患者血浆标本的检测中,MTB cfDNA检测法检出1例阳性,而GeneXpert MTB/RIF与涂片抗酸染色均未检出,提示cfDNA血浆检测具有作为早期诊断肺外结核病工具的潜力,但本研究中血浆标本量较小,且来自不同类型的肺外结核患者,其在肺外结核的诊断效能需要进一步研究证实。

综上所述,MTB cfDNA作为新型分子标志物在肺外结核诊断中具有较好的应用前景,有望为少菌型结核病患者尤其是病原学证据获得困难的结核患者的早期诊断提供强有力的证据。

（参考文献略）